產(chǎn)品名稱：乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞
英文簡稱：BT-474 [BT474]細(xì)胞

貨號：LZ-X969461
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時(shí)間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
干酪乳桿菌干酪亞種尼泊金異丁酯;Isobutyl4-Hy三糖鐵(TSI)瓊脂P-糖蛋白

巴氏醋桿菌巴氏亞種牛膝甾酮;Lnokosterone培養(yǎng)基顆粒蛋白前體抗體

瑞士乳桿菌尿苷;Uridine三糖鐵(TSI)瓊脂斜面磷脂酰肌激酶抗體

乳鏈球菌尿嘧啶;Uracil賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基孕激素誘導(dǎo)阻斷因子抗體

德氏乳桿菌保加利亞亞種鳥嘌呤;Guanine賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)piwi樣1蛋白抗體

醋酸菌L-鳥氨酸鹽酸鹽;L(+)-Ornith氨基酸脫羧酶試驗(yàn)對照蛋白激酶A抗體

蘇云金芽孢桿菌鳥苷;Guanosine無菌液體石蠟蛋白激酶B

蘇云金芽孢桿菌尿素;UreaONPG培養(yǎng)基蛋白激酶C抗體

蘇云金芽孢桿菌尼奧林;Neoline，Bullatin營養(yǎng)瓊脂（NA）尿激酶型纖溶酶原激活因子抗體

蘇云金芽孢桿菌?；蛆Z去氧膽酸;Taurochenod營養(yǎng)瓊脂平板（NA）人胎盤生長因子相關(guān)抗體

蘇云金芽孢桿菌牛血清白蛋白;Bovinealbumi蛋白胨水（胰蛋白胨培養(yǎng)基）小鼠胎盤生長因子抗體

蘇云金芽孢桿菌耐斯糖;Nystose培養(yǎng)基胎盤生長因子抗體

發(fā)根土壤桿菌（發(fā)根植物單胞菌）尿囊素;AllantoinKovacs氏靛基質(zhì)試劑外周髓鞘蛋白-22

植物乳桿菌牛磺熊去氧膽酸;Tauroursodeo緩沖葡萄糖蛋白胨水平足蛋白抗體

蔥頭伯克氏菌牛蒡子苷元;ArctigeninV-P試劑“撲克蒙"蛋白又稱“波克曼"蛋白抗體
BT-474 [BT474]細(xì)胞維生素A抗體科羅索 COROSOLIC ACID(P)Human, Mouse, Rat

蛋白聚糖Versican抗體科羅索 COROSOLIC ACID(P)Human, Mouse, Rat

VWCE抗體可替寧 COTININE(RG)Human, Mouse, Rat

視神經(jīng)視網(wǎng)膜相關(guān)蛋白VAX1抗體2-鄰香豆 COUMARIC ACID, 2-(P)Human, Mouse, Rat

視神經(jīng)視網(wǎng)膜相關(guān)蛋白VAX2抗體2-鄰香豆 COUMARIC ACID, 2-(P)Human, Mouse

維生素D3受體抗體反-對香豆 COUMARIC ACID, TRANS-P-(P)Human, Mouse, Rat

B淋巴前體蛋白1抗體反-對香豆 COUMARIC ACID, TRANS-P-(P)Human, Mouse

血管內(nèi)皮粘附分子抗體芹菜素-7-葡萄糖苷 APIGENIN-7-O-GLUCOSIDE (COSMOSIIN)(P)Human

血管非炎性蛋白2抗體芹菜素-7-葡萄糖苷 APIGENIN-7-O-GLUCOSIDE (COSMOSIIN)(P)Human, Mouse