注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
L-賴(lài)氨酸醋酸使用說(shuō)明書(shū)Anti-CD163 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 發(fā)育生物學(xué) 染色質(zhì)和核信號(hào) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

無(wú)水肌酸價(jià)格Anti-CD151 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)  

D-纈氨酸甲酯鹽酸鹽使用說(shuō)明書(shū)Anti-CD160 Antibody研究領(lǐng)域  神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞膜受體  

蛋白保護(hù)劑GH保存Anti-CD163 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 染色質(zhì)和核信號(hào) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物  

T3 RNA聚合酶保存Anti-CD163 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物  

甲基綠實(shí)驗(yàn)步驟Anti-CD163 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 染色質(zhì)和核信號(hào) 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物 表觀(guān)遺傳學(xué)  

D-果糖-6-磷酸二鈉實(shí)驗(yàn)步驟Anti-CD19 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物  

5-胞苷三磷酸二鈉鹽價(jià)格Anti-CD1B Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 生長(zhǎng)因子和激素 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物  

對(duì)氨基苯磺酸價(jià)格Anti-CD19 Antibody(原貨號(hào)PB0404)研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 糖蛋白 細(xì)胞骨架 細(xì)胞外基質(zhì)  

豬低分子肝素（LMWH）elisa試劑盒Anti-CD1D Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 結(jié)合蛋白 細(xì)胞類(lèi)型標(biāo)志物 血管內(nèi)皮細(xì)胞 細(xì)胞骨架 細(xì)胞外基質(zhì)  

豬白介素6（IL-6）elisa試劑盒Anti-CD1A Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號(hào)  

豬白介素4（IL-4）elisa試劑盒Anti-CD1C Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號(hào) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 新陳代謝 表觀(guān)遺傳學(xué)  

豬白介素15（IL-15）elisa試劑盒Anti-CD1A Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號(hào)  

小鼠維生素B6（VB6）elisa試劑盒Anti-CD19 Antibody研究領(lǐng)域  免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號(hào)  

小鼠突觸融合蛋白2（STX2）elisa試劑盒Anti-CD1D Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞周期蛋白 細(xì)胞骨架 G蛋白信號(hào)  

BCYEAgarBase

MRS agar Lactobacillus agar acc.to DEMAN,ROGOSA and SHARPE MRS 1.10660.0500 MERCK默克 incubation media MRS agar Lactobacillus agar acc.to DEMAN,ROGOSA and SHARPE MRS 1.10660.0500 MERCK默克

疊氮化物葡萄糖液態(tài)培養(yǎng)基水和污水中糞性鏈球菌發(fā)酵法的推測(cè)試驗(yàn)(CJ/T148-2001和SN/T2206.5-2009)。

SD大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞*培養(yǎng)基SDratbonemarrowmesenchymalstemcellsincompletemedium

MUGNutrientAgar

明膠培養(yǎng)基  Gelatin Medium  250克  細(xì)菌明膠液化試驗(yàn)

靛基質(zhì)培養(yǎng)基  Indole Medium  250克  細(xì)菌靛基質(zhì)試驗(yàn)

鹽培養(yǎng)基  Malonate Broth  10克  測(cè)定腸道細(xì)菌對(duì)鹽的利用試驗(yàn)

脫氧核糖核酸酶瓊脂  Dnase Agar  100克  細(xì)菌DNA酶檢測(cè)
變形絲囊霉菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格兔肺成纖維細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

兔肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

兔肺大動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

兔肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

兔肺巨噬細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶

兔肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。